2-[[2-Ethoxy-4-(4-Hydroxy-1-piperidinyl)phenyl]amino]-5,11-Dihydro-5,11-Dimethyl-6H-Pyrimid[4,5-b][1,4]Benzodiazepin-6-

Beschreibung des Produkts:

Produktbezeichnung: 2-[[2-Ethoxy-4-(4-Hydroxy-1-piperidinyl) phenyl]amino]-5,11-Dihydro-5,11-Dimethyl-6H-Pyrimid[4,5-b][1,4]Benzodiazepin-6-one CAS-Nr:1234480-50-2

Synonyme:

XMD 8-92 (freie Basis);

6H-Pyrimido[4,5-b][1,4]Benzodiazepin-6-one,2-[[2-Etoxy-4-(4-Hydroxy-1-Piperidinyl)phenyl]amino]-5,11-Dihydro-5,11-Dimethyl-;

Chemische und physikalische Eigenschaften:

Aussehen: weißes bis knapp weißes Pulver

Angabe: ≥98,0%

Dichte:1.3 g/cm3

Siedepunkt:7410,8°C bei 760 mmHg

Erleuchtung:4020,4°C

In Vitro

XMD8-92 zeigt die größte Affinität zu BMK1 mit einer gemessenen Dissoziationskonstante (Kd) von 80 nM, während DCAMKL2, TNK1 und PLK4 Kd ′s von 190, 890 und 600 nM zeigen.XMD8-92 wird mit Hilfe der KiNativ-Methode gegen alle nachweisbaren Kinasen in HeLa-Zelllysaten profiliert und ist etwa 10-mal selektiver für BMK1 mit einer IC50 von 1.5 μM stärker als die stärksten Off-Targets, TNK1 (IC50=10 μM) und ACK1 (aka TNK2, IC50=18 μM).MEK5 wird nicht signifikant von XMD8-92 bei bis zu 50 μM gehemmt [1]. XMD8-92 zeigt eine hohe Selektivität gegenüber BMK1 in einem in vitro ATP-Standort-Konkurrenzbindungstest gegen 402 Kinasen sowie in der KiNativ-Methode gegen alle nachweisbaren Kinasen in HeLa-Zelllysaten.XMD8-92 blockiert die EGF-induzierte Aktivierung von BMK1 mit einer IC50 von 240 nM und, hat XMD8-92 bei einer Konzentration von bis zu 5 μM keine hemmende Wirkung auf die Aktivierung von ERK1/2 durch EGF[2].

Im Leben

XMD8-92 hemmt das Tumorwachstum in vivo signifikant um 95%. Die Pharmakokinetik von XMD8-92 wird bei Sprague-Dawley-Ratten untersucht, denen eine einzelne intravenöse oder orale Dosis verabreicht wurde. XMD8-92 hat eine 2.0 h Halbwertszeit Clearance von 26 ml/min/kg. XMD8-92 hat eine moderate Gewebeverteilung mit einem berechneten Verteilungsvolumen von 3,4 L/kg.Nach einer Einzeldosis von 2 mg/kgIn den Toleranzversuchen wurden maximale Plasmakonzentrationen von etwa 500 nM nach 30 Minuten beobachtet, wobei nach 8 Stunden nach der Verabreichung 34 nM verbleibten.hohe Plasmakonzentrationen des Arzneimittels (ungefähr 10 μM nach einer IP-Dosierung von 50 mg/kg) während der gesamten 14-Tage erhalten bleibenXMD8-92 scheint gut verträglich zu sein und die Mäuse erschienen gesund ohne Anzeichen von Leiden.Die Behandlung mit XMD8-92 sowohl bei immunkompetenten als auch bei immundefizienten Mäusen blockierte das Wachstum von Lungen- und Gebärmutterhals-Xenotransplantattumoren., bzw. um 95%. This remarkable anti-tumor effect of XMD8-92 in lung and cervical xenograft tumor models is due to XMD8-92’s capacity to inhibit tumor cell proliferation through the PML suppression-inducted p21 checkpoint proteinAußerdem führt der BMK1-Knockout (KO) bei Mäusen zu einer vollständigen und irreversiblen Entfernung des BMK1-Proteins.Während die Behandlung mit XMD8-92 bei Mäusen nur die Aktivität von BMK1 unterdrücktZweitens kann die bei BMK1-KO-Mäusen beobachtete Gefäßinstabilität auf das Fehlen der C-Terminal-Nicht-Kinase-Domain von BMK1 zurückzuführen sein.die bei der Behandlung von Tieren mit XMD8-92 noch vorhanden ist [2].

Kinase-Analyse

Die KiNativ-Profilierung von XMD8-92 erfolgt sowohl mit ATP als auch mit ADP-Acylphosphate-Destiobiotin mit folgenden Modifikationen.HeLa-Zelllysate (5 mg/ml Gesamtprotein) werden in Gegenwart von XMD8-92 bei 50 μM inkubiert., 10 μM, 2 μM, 0,8 μM und 0 μM für 15 Minuten vor Zugabe der ATP- oder ADP-Acylphosphatsonde (5 μM Endkonzentration der Sonde).Die Probenreaktionen wurden für 10 Minuten fortgesetzt und durch Zugabe von Harnstoff gestoppt und zur MS-Analyse verarbeitet.. Samples are analyzed by LC-MS/MS on a linear ion trap mass spectrometer using a time segmented “target list” designed to collect MS/MS spectra from all kinase peptide-probe conjugates that can be detected in HeLa cell lysatesDiese Zielliste wird erstellt und validiert durch vorherige umfassende Analyse von HeLa-Lysaten.Bis zu vier charakteristische Fragment-Ionen für jedes Kinase-Peptid-Sonde-Konjugat werden verwendet, um Signale für jede Kinase zu extrahieren, und ein Vergleich von mit einem Inhibitor behandelten und Kontroll- (unbehandelten) Lysaten ermöglichen eine genaue Bestimmung der %-Inhemmung an jedem Punkt.Ein Manuskript, das die Details dieses gezielten Massenspektrometrie-Ansatzes beschreibt, ist in Vorbereitung.[1].

Tierverwalter

Mäuse[1] 5×105 HeLa-Zellen werden in DMEM resuspendiert und subkutan in die rechte Flanke von 6-wöchigen Nod/Scid-Mäusen (Tag 0) injiziert.Die Mäuse wurden in 2 Gruppen (6 Tiere) randomisiert.Die XMD8-92-Gruppe (1-28 Tage) wird mit XMD8-92 in einer Dosis von 50 mg/kg zweimal täglich intraperitoneal behandelt.Die Kontrollgruppe erhält täglich Injektionen der Trägerlösung als Kontrollgruppe.Am 7. Tag wird die Kontrollgruppe in 2 Gruppen randomisiert (6 Tiere, XMD8-92, 7-28 Tage und 12 Tiere, Kontrollgruppe).Die restliche Kontrollgruppe wird in 2 Gruppen (6 Tiere) randomisiert.Die Behandlung mit XMD8-92 in den Gruppen XMD8-92 (7-28 Tage) und XMD8-92 (14-28 Tage) beginnt am 7. Tag bzw. am 14. Tag.Die Größe des Tumors wird mit einem Klemm gemessen, und das Tumorvolumen wird bestimmt[1].

Referenzen:

[1] Yang Q, et al. Pharmakologische Hemmung von BMK1 unterdrückt das Tumorwachstum durch promyelozytisches Leukämieprotein.Krebszelle. 2010 Sep 14;18(3):258-67.

[2] Yang Q, et al. Ziel der BMK1 MAP-Kinase-Weg in der Krebstherapie.

Die Kinase ALK stimuliert die Kinase ERK5 zur Förderung der Expression des Onkogens MYCN im Neuroblastom. Sci Signal. 2014 Oct 28;7(349):ra102.

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